利用CRISPR-Cas9技术构建S100A8基因敲除的CNE2细胞系

作者：孟盈; 杨建宇; 欧阳春; 黄元姣^*

来源：智慧健康, 2019, 5(10): 17-20.

DOI：10.19335/j.cnki.2096-1219.2019.10.009

• S100A8
• CRISPR-Cas9技术
• 鼻咽癌
• 基因敲除

目的利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建S100A8基因敲除的CNE2稳定细胞系。方法通过慢病毒转染,构建可以稳定表达Cas9蛋白的CNE2细胞株。针对S100A8基因作用的功能区域,设计靶向S100A8基因的g RNA,构建Lentiguide-Puro-sg重组质粒并转化stbl3感受态细胞,筛选出重组子后通过测序验证g RNA的有效性。测序鉴定后将Lentiguide-Puro-sg重组载体通过转染试剂转染CNE2细胞系。通过嘌呤霉素进行阳性单克隆筛选,通过Western Blot检测S100A8基因的表达。结果测序结果显示LentiGuide-Puro-sg载体构建成功;Western Blot结果显示转染过LentiGuide-Puro-sg重组载体的细胞的S100A8不表达。结论利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建了S100A8基因敲除的CNE2细胞,为后续继续研究S100A8基因在鼻咽癌细胞中的作用机制和功能奠定了基础。

• 单位
  广西医科大学