锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆表达与免疫原性分析

作者：杭建雄; 黄岳; 颜欣欣; 刘云秋; 赵琪; 何龙; 冉荣坤; 李秀; 刘菊枚; 李国清^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(07): 1361-1365.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.17

• 锡兰钩虫
• 谷胱甘肽-S-转移酶
• 基因克隆
• 原核表达
• 免疫原性

为了克隆表达锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶(Ace-GST)基因,制备多克隆抗体并分析其免疫原性,为疫苗候选分子的筛选奠定基础。根据GenBank上锡兰钩虫GST基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增Ace-GST基因,将扩增产物克隆至pET-32a载体并转入E.coli BL21(DE3)宿主菌表达,重组蛋白纯化后免疫昆明小鼠,分别用间接ELISA法和MTT法检测免疫鼠血清IgG抗体水平与脾淋巴细胞增殖情况。结果显示Ace-GST基因ORF全长468 bp,编码155个氨基酸,与ν类GSTs聚为同一分支;重组Ace-GST相对分子质量为36 000,可诱导产生特异性IgG抗体,并能显著刺激免疫小鼠脾淋巴细胞增殖。结果表明重组Ace-GST蛋白能诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性。

• 单位
  华南农业大学