不同浓度γ-分泌酶抑制剂对人牙周膜干细胞骨向分化的影响

作者：邱申彩; 戴晓玮; 龙晏; 陈晓燕; 吴佩玲^*

来源：中华口腔医学研究杂志(电子版), 2018, 12(06): 335-341.

• 牙周膜
• 干细胞
• 成骨细胞
• Notch信号通路

目的研究不同浓度的γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对人牙周膜干细胞(hPDLSC)骨向分化的影响。方法将体外培养的hPDLSC随机分为5组:(1)2个对照组,即hPDLSC组和二甲基亚砜(DMSO)组(加入0.173 25μL/L DMSO);(2)3个实验组,分别加入25、50和75μmol/L的DAPT,即DAPT25组、DAPT50组及DAPT75组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度DAPT对hPDLSC的增殖情况的影响;通过茜素红染色、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)以及蛋白免疫印记法(Western blot)检测不同浓度DAPT对hPDLSC的Notch信号抑制能力及成骨能力的影响。使用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果 CCK-8结果显示,DMSO浓度为0.173 25μL/L时对hPDLSC的增殖没有明显影响,同时不同浓度的DAPT均会抑制hPDLSC增殖,且DAPT浓度为50μmol/L时对细胞的抑制能力最强(P<0.001);茜素红染色结果显示,hPDLSC组及DMSO组染色明显,矿化结节面积大且颜色深,两组间无明显差异,而3个实验组形成的矿化结节均有所减少,其中DAPT浓度为50μmol/L时较浓度为25及75μmol/L时形成的矿化结节数量更少且矿化结节面积更小;实时荧光定量PCR结果显示,DAPT浓度为50μmol/L时,其成骨标志基因牙骨质附着蛋白(CAP,0.574±0.182)、骨钙蛋白(OCN,0.269±0.100)、Runt相关转录因子2(Runx2,0.470±0.080)的表达量均明显减少,Notch信号通路相关分子Notch1及Hes-1的表达水平分别为0.467±0.118及0.318±0.015,较其余组也有所减少,且DAPT浓度为50μmol/L时的相关成骨标志基因表达量最低(P<0.05),Notch信号通路相关分子Notch1及Hes-1的表达水平也最低(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比3个实验组Notch、Hes-1及Runx2的蛋白表达量均有减少,其中50μmol/L的DAPT组Runx2的蛋白表达量(0.116±0.006)明显比其它组少,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 DMSO浓度为0.173 25μL/L时对hPDLSC增殖及骨向分化没有明显影响;DAPT可抑制Notch信号通路的传递,从而抑制hPDLSC增殖及骨向分化,同时DAPT浓度为50μmol/L时抑制能力最强。

• 单位
  新疆医科大学第二附属医院; 乌鲁木齐市口腔医院