上调自噬抑制LPS诱导的小胶质细胞死亡

作者：刘雪; 石星星; 李项瑞; 韦秋凤; 熊利泽

来源：神经解剖学杂志, 2017, 33(01): 23-28.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2017.01.004

• 小胶质细胞
• LPS
• 自噬上调
• 存活

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理后,N9细胞自噬水平的变化,并探究LPS刺激下不同自噬水平对N9细胞的损伤和存活的影响。方法:体外培养N9细胞,给予24 h LPS处理,免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)及溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)的表达,Western Blot检测LC3与Beclinl的表达。LPS处理后分别使用自噬诱导剂雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)调节N9细胞自噬水平,Western Blot检测不同处理组自噬标记蛋白LC3、Beclinl的表达;使用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase)试剂盒、Cell Count Kit(CCK8)试剂盒检测细胞损伤及存活。结果:(1)LPS刺激造成N9细胞损伤,LDH释放量(113.6%±3.2%)较对照组(100.0%±3.9%)显著增加(P<0.01),存活细胞数(69.8%±2.1%)较对照组(100.0%±3.9%)显著减少(P<0.001);(2)与对照组相比,LPS显著上调N9细胞LC3以及Beclinl水平(P<0.05)并同时上调LAMP2水平;(3)RAP上调LPS处理后N9细胞的自噬水平并减少小胶质细胞损伤(100.8%±2.3%),促进细胞存活(87.4%±5.7%)(P<0.05)。3-MA则抑制LPS处理后N9细胞自噬水平并降低细胞存活(60.6%±2.9%),而细胞损伤(123.2%±3.7%)与LPS组相比未见统计学差异;(4)RAP与3-MA分别促进或抑制LPS诱导的N9细胞自噬相关蛋白的表达(P<0.05)。结论:上调自噬水平减少LPS刺激诱导的N9细胞损伤,促进细胞存活。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院; 广西医科大学第一附属医院