人羊膜间充质干细胞无血清培养方法的建立

作者：刘晓玉; 施萍; 潘伯臣^*; 庞希宁^*

来源：基础医学与临床, 2021, 41(08): 1181-1185.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2021.08.018

• 人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)
• 无血清培养
• 增殖
• 迁移

目的建立一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的无血清培养方法。方法用胰蛋白酶-胶原蛋白酶两步消化法分离人羊膜间充质干细胞,用含1×ITS、0.5%人血清白蛋白、10 ng/mL bFGF、100μg/mL L-ascorbic acid、100 U/mL青链霉素及2.5μg/mL两性霉素B的DMEM/F12无血清培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态及增殖状态,免疫荧光技术检测细胞表型,WST法测定细胞增殖曲线,细胞划痕伤口闭合试验检测无血清培养的细胞迁移能力,实时定量PCR检测生长因子VEGF、KGF、PDGF和IGF-1的表达。结果无血清培养并纯化扩增的人羊膜间充质干细胞呈梭形,表达细胞表面标志物CD73和CD90,不表达CD45和CD34。细胞增殖曲线为S形,对数增殖期的平均倍增时间为72 h,与胎牛血清培养的人羊膜间充质干细胞相比,迁移能力增强,生长因子VEGF、KGF、PDGF和IGF-1表达上调(P<0.05)。结论建立了一种人羊膜间充质干细胞的无血清培养方法,为临床应用提供实验依据。

• 单位
  中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院