脊椎动物雌激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控及其与蜕皮激素受体相互作用的MST分析

作者：王勇; 彭楚玥; 吴金鑫; 沈关望; 林英; 夏庆友

来源：昆虫学报, 2017, 60(12): 1367-1375.

DOI：10.16380/j.kcxb.2017.12.002

• 家蚕
• 雌二醇
• 蜕皮激素
• 卵黄原蛋白
• 蜕皮激素受体
• 基因表达
• 微量热泳动仪

【目的】雌激素雌二醇(E2)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E2产生一定的应答。本研究在明确E2能影响家蚕Bombyx mori卵黄原蛋白基因(BmVg)表达的前提下,分析其对这一基因表达的调控机制。【方法】取BmVg高量表达时的家蚕雌性幼虫(上蔟后60 h)脂肪体,用不同浓度(0.001,0.05,0.5,5和50 nmol/L)E2处理后,通过qRT-PCR检测BmVg表达的变化,分析家蚕对E2的应答;克隆家蚕蜕皮激素受体基因(BmEcRB1),构建原核表达载体,表达并纯化BmEcRB1蛋白后与E2体外孵育,通过微量热泳动仪(MST)分析E2与BmEcRB1的结合情况。【结果】不同浓度E2均显著抑制离体培养的雌蚕脂肪体中BmVg基因的表达。MST实验证实,E2与BmEcRB1具有一定的亲和力,解离常数(Kd)为77.8±22μmol/L。【结论】结果说明,E2对BmVg表达的影响是通过与蜕皮激素(20E)竞争性结合BmEcRB1实现的。

• 单位
  西南大学; 家蚕基因组生物学国家重点实验室