基于Nrf2/HO-1信号通路的夜关门提取物对谷氨酸诱导小鼠海马细胞HT22损伤的保护作用及机制研究

作者：郭丰; 黄山; 李斌^*

来源：中国药房, 2020, 31(11): 1303-1308.

• 夜关门
• 谷氨酸
• 血红素加氧酶1
• 核因子2
• 小鼠
• 海马细胞HT22
• 机制

目的:基于核因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路研究夜关门提取物对谷氨酸诱导小鼠海马细胞HT22损伤的保护作用及机制。方法:采用谷氨酸(5 mmol/L)建立HT22细胞损伤模型后,以水溶性维生素E为阳性对照(50μmol/L),采用MTT法检测0(空白对照)、25、50、100μg/mL夜关门的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯提取物预处理12 h后对谷氨酸诱导损伤细胞增殖的影响。以水溶性维生素E为阳性对照(50μmol/L),采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐探针(DCFH-DA)法检测0(空白对照)、25、50、100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物预处理12 h后对谷氨酸诱导损伤细胞中活性氧(ROS)水平的影响;以HO-1激动剂钴-原卟啉为阳性对照,采用Western blotting法检测0(空白对照)、25、50、100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物处理24 h后对细胞中HO-1蛋白表达的影响;分别采用Western blotting法(药物分别处理0.5、1、1.5 h)和免疫荧光染色法(药物处理1 h)检测100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物处理后对细胞核内外Nrf2蛋白表达的影响。采用小干扰RNA(si-RNA)转染技术进行HO-1基因沉默后,考察100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物对谷氨酸诱导损伤细胞的存活率以及细胞中ROS水平的影响。结果:与空白对照比较,50、100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物均可显著升高细胞的存活率(P<0.05),并降低细胞中ROS水平(P<0.05);25、50、100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物均可显著升高细胞中HO-1蛋白表达水平(P<0.05),100μg/mL夜关门二氯甲烷提取物可显著降低细胞质中Nrf2蛋白水平并升高细胞核中Nrf2蛋白水平(P<0.05)。HO-1基因沉默后,夜关门二氯甲烷提取物对谷氨酸诱导损伤细胞的促增殖以及降低ROS水平的作用被逆转(P<0.05)。结论:夜关门二氯甲烷提取物可通过激活Nrf2信号通路,诱导HO-1蛋白的表达,从而发挥对谷氨酸诱导损伤HT22细胞的保护作用。

• 单位
  青岛科技大学; 白城医学高等专科学校