木薯MeSWEET10a基因启动子EBE区编辑载体的构建及验证

作者：张彤; 王亚杰; 郭文雅; 李瑞梅; 刘姣; 郭建春; 胡新文; 姚远^*; 耿梦婷^*

来源：热带作物学报, 2021, 42(11): 3120-3125.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2021.11.010

• 木薯
• 细菌性枯萎病
• MeSWEET10a
• CRISPR/Cas9

木薯细菌性枯萎病(cassavabacterialblight,CBB)是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种(Xanthomonasaxonopodis pv. Manihotis, Xam)引起的木薯重要病害,影响木薯产量,我国主栽的木薯品种均不抗Xam。Xam分泌的TAL20效应蛋白可结合木薯MeSWEET10a基因启动子的EBE区,激活该基因表达,促进糖类运输至Xam侵染的部位,为病菌的繁殖提供碳水化合物。本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0设计EBE区的基因编辑靶点,构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒pCAMBIA1301-Cas9-EBE-sgRNA。将重组质粒转化LBA4404根癌农杆菌,利用农杆菌介导法侵染木薯脆性胚性愈伤组织。提取侵染和未侵染的木薯脆性胚性愈伤组织DNA,PCR扩增靶点EBE区及潜在的脱靶位点,并进行Sanger测序分析编辑效果。结果发现EBE区被成功编辑,且没有脱靶现象。本研究有助于进一步获得MeSWEET10a基因启动子EBE区域的木薯突变体,以增强木薯抗细菌性枯萎病的能力。

• 单位
  中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 海南大学