类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备

作者：吴利; 黎礼达; 胡艺; 黎元莉; 陈海; 朱雄; 胡治强; 马腾飞; 韩丹; 李倩; 曹刘素; 尹小毛; 毛旭虎^*

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(18): 1663-1667.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201803142

• 类鼻疽杆菌
• 蛋白表达
• 抗体制备与鉴定

目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA检测抗体的特异性,并分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位。结果成功扩增类鼻疽杆菌BPC006株基因组中的BPSS1617基因;酶切和测序验证重组表达质粒p ET-22b-BPSS1617构建成功;经IPTG诱导表达、包涵体洗涤、纯化以及变性复性,成功获得纯度>95%,分子量为25×103的目的蛋白;将纯化的BPSS1617重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗BPSS1617蛋白多克隆抗体,经实验验证其特异性良好;同时BPSS1617蛋白主要定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。结论成功构建、表达、纯化获得BPSS1617蛋白,并成功制备了其特异性多克隆抗体,并且该蛋白定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军陆军军医大学; 三亚市人民医院