虹鳟TRIM25基因克隆及其在IHNV感染过程中的表达分析

作者：雷明荃; 黄进强; 李永娟^*; 吴深基; 赵璐; 潘玉财; 孙同振

来源：农业生物技术学报, 2023, 31(08): 1684-1695.

• 虹鳟
• 三基序蛋白25(TRIM25)
• 传染性造血器官坏死病毒(IHNV)
• 基因克隆
• 表达分析

三基序蛋白25(tripartite motif containing 25, TRIM25)是宿主抗病毒免疫应答中发挥重要作用的TRIM蛋白家族成员之一。为了解虹鳟(Oncorhynchus mykiss) TRIM25基因分子特征及其在感染传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV)过程中的表达变化，本研究采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术获得虹鳟TRIM25基因cDNA全长序列(GenBank No. OL692831)，并对其进行生物信息学分析，同时利用qPCR技术检测TRIM25基因在健康虹鳟不同组织及感染IHNV后不同时间点(0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120和144 h)肠道、肝脏、脾脏、皮肤、头肾和鳃中的表达变化。结果显示，虹鳟TRIM25基因cDNA全长序列4 745 bp，其开放阅读框2 028 bp，编码675个氨基酸。生物信息学分析表明，TRIM25蛋白分子量为76.04 kD，理论等电点为8.79，不稳定系数为49.2，平均亲水系数为-0.591，属于不稳定亲水蛋白。对TRIM25蛋白结构域分析发现，该蛋白包含RING、B-boxes、B-Box C-terminal domain和PRY-SPRY结构域。同源比对及系统进化树分析表明，虹鳟与大马哈鱼(Oncorhynchus keta)同源性最高(94.96%)且亲缘关系最近，与哺乳动物和两栖动物同源性较低。qPCR检测发现，TRIM25基因在健康虹鳟各组织中均有表达，其在肝脏中的表达量最高，头肾和脑中的表达量次之，皮肤中的表达量最低。感染IHNV后，TRIM25基因在肝脏、头肾、脾脏、肠道和皮肤的表达量均在48 h达到峰值，鳃在96 h表达量达到峰值，各组织在峰值时的表达量与对照组相比差异极显著(P<0.01)，其中以头肾和脾脏表达变化较显著，分别为对照组的5.72和4.33倍。上述结果表明，TRIM25基因可能在虹鳟抗IHNV感染的免疫应答中发挥着重要作用。本研究为深入研究TRIM25基因在鱼类抗病毒免疫调控中的作用提供了基础资料。

• 单位
  甘肃农业大学