金黄色葡萄球菌蛋白A突变体的表达纯化与亲和色谱填料的制备

作者：韩依珂; 吴勇; 赵伟; 张喜全; 冯军^*

来源：中国医药工业杂志, 2019, 50(07): 755-761.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2019.07.010

• 金黄色葡萄球菌蛋白A突变体
• 键合反应条件
• 动态结合载量

对本实验室构建表达金黄色葡萄球菌蛋白A突变体的工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-SP1SPA进行高密度发酵和重组蛋白的表达。发酵液经2步色谱纯化后获得纯度98.48%的蛋白A突变体。对其与环氧预活化琼脂糖的键合反应条件进行优化,确定最佳参数为:反应体系中每克基质加入50 mg蛋白A突变体至终浓度16 mg/ml,在pH 8.5条件下反应18 h。性能测定结果表明抗体结合时间为6 min时,自制填料的动态结合载量为75 mg/ml填料:抗体纯化回收率为85%;使用0.1 mol/L氢氧化钠溶液在位清洗20轮(每轮5次运行)后,填料动态结合载量保持在初始载量的97%以上。

• 单位
  中国医药工业研究总院