阳春砂倍半萜合酶AvTPS基因的生物信息学分析和表达纯化

作者：张斌; 印思颖; 付献瑶; 沈良华; 郑自由; 周仁超; 王峰^*

来源：暨南大学学报(自然科学与医学版), 2021, 42(05): 523-534.

DOI：10.11778/j.jdxb.2021.05.009

• 阳春砂
• 倍半萜合酶
• 表达纯化
• 生物信息学分析

目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233, Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1 650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到pMD-18T载体.生物信息分析表明,AvTPS蛋白含549个氨基酸残基,二级结构以α-螺旋为主等信息.通过蛋白的表达和纯化,获得纯度为94.22%的可溶性AvTPS蛋白.结论:从阳春砂中可成功克隆出AvTPS的编码基因,为后续研究其基因在阳春砂中的特异性表达奠定基础.

• 单位
  广东省热带亚热带植物资源重点实验室; 暨南大学; 中山大学生命科学学院; 药物研究所