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摘要
柱花草(Stylosanthes guianensis)是一种重要的热区豆科牧草，为利用原生质体瞬时表达体系开展柱花草基因功能研究，以20 d龄期‘热研5号’柱花草子叶为试验材料，通过正交试验考察不同因素对原生质体分离及转化效率的影响。结果表明：采用1.5%纤维素酶、1.25%离析酶、0.5 mol·L-1甘露醇和4 mmol·L-1MES酶解液组合，酶解时间为16 h时，原生质体的产量和活性均达到最佳，分别为(4.567×106)个·g-1和92.271%;原生质体浓度为(6×105)个·mL-1、质粒浓度为0.6μg·μL-1,PEG-4000浓度为50%、转化时间为5 min时，转化效率最高，可达52.524%。构建了目标蛋白SgRKL1表达载体pA7-BIUTNT::SgRKL1-GFP,利用PEG介导法将其转入柱花草原生质体，激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示SgRKL1蛋白定位于细胞膜上，说明所建立的柱花草叶肉原生质体瞬时表达体系可应用于目标基因的瞬时表达和亚细胞定位研究。
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