牛流行热病毒感染白纹伊蚊细胞免疫调控相关基因的差异表达分析

作者：高闪电; 田占成; 王锦明; 独军政; 关贵全; 殷宏^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(01): 26-32.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.01.05

• 牛流行热病毒
• 白纹伊蚊
• Toll样受体通路
• Janus激酶/信号转导与转录激活子通路

为了阐明牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus, BEFV)在媒介蚊形成持续感染过程中免疫相关基因的调控作用，利用白纹伊蚊幼蚊细胞C6/36从牛体传代抗凝血分离BEFV JT02L株，用geNorm和NormFinder软件分析感染细胞看家基因的mRNA表达水平稳定性，筛选获得最稳定表达的内参基因，并用荧光定量RT-PCR进行相对定量分析感染细胞Toll样受体通路、免疫缺陷通路(IMD)以及Janus激酶/信号转导与转录激活子通路(JAK-STAT)相关基因的mRNA水平。结果显示，利用C6/36细胞分离获得可稳定传代BEFV株，经微量免疫荧光试验测定其毒价为1×10~(-5.27) TCID_(50)/mL,在C6/36细胞复制48～72 h时病毒载量达到最高水平。BEFV感染C6/36细胞，核糖体蛋白s17基因为最稳定内参基因，Toll样受体通路分子转录因子rel1、抗菌肽attacin B、defa、diptericin、lysc以及丝氨酸蛋白酶clipB27基因mRNA水平显著上调，IMD通路转录因子2 mRNA水平上调较弱，但可通过上调其下游的细胞因子vago基因表达平刺激JAK-STAT信号通路抗病毒基因vir-1上调表达。本试验阐明了BEFV感染蚊媒细胞过程中调控性基因的差异表达情况，为深入研究BEFV的媒介传播奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所