禽呼吸道7种病毒多重连接探针扩增检测技术的建立与应用

作者：周莹珊; 陈琳; 周柯; 王雨萌; 邵春艳; 杨永春; 黄保续; 王晓杜^*; 宋厚辉^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(12): 2311-2319.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.12.06

• 多重连接探针扩增技术(MLPA)
• 禽呼吸道病毒
• AIV
• NDV
• aMPV
• IBV
• ILTV
• 多重PCR

建立了一种多重连接探针扩增技术(MLPA),能快速区分临床上引起禽呼吸道疾病的7种病原,即禽流感病毒(AIV)H9亚型、AIV H5亚型、AIVH7亚型、新城疫病毒(NDV)、禽偏肺病毒(aMPV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)和禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)。对扩增产物进行毛细管电泳分析,结果显示,该方法对不同病原核酸的最低检测极限可以达到5.3×100～1.40×102拷贝/反应,特异性好,探针之间无交叉反应。应用MLPA方法对122份临床样品进行检测,并与国家或行业标准进行比较,结果显示AIV H7亚型、NDV、aMPV、IBV、ILTV的特异性和敏感性均达到100%。结果与国家或行业标准PCR方法的检测结果一致性高,且克服了国家或行业标准PCR方法无法进行多重检测的缺点。该方法最多可同时检测40多种病原,对于复杂症候群的快速和高通量检测具有重要临床意义,可推广到其他多重病毒的检测中,显示出广阔的应用前景。

• 单位
  动物科技学院; 浙江农林大学; 中国动物卫生与流行病学中心