茄匍柄霉菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：谢学文; 陈利达; 曹金强; 韩道杰; 石延霞; 柴阿丽; 李磊^*; 李宝聚^*

来源：植物病理学报, 2021, 51(04): 618-625.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000717

• 茄匍柄霉菌
• 实时荧光定量PCR
• 湿度
• 病残体

为了准确检测病残体内茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)DNA含量在土壤内的动态变化,本研究根据三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计并筛选特异性引物Stem-g7F/Stem-g7R,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为150 bp的目的片段。建立的Stemphylium solani实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高1 000倍,且特异性良好。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992。利用所建立的qRT-PCR方法对病残体进行检测发现,病残体DNA初始拷贝数为3.69×109拷贝数/g,经过温度27℃、80%湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至1.21×106拷贝数/g,而在温度27℃、20%湿度下含量为1.29×1010拷贝数/g。因此,建立的S.solani的qRT-PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体S.solani的含量,为番茄匍柄霉叶斑病的早期预防和流行监测提供有效的技术手段。

• 单位
  中国农业科学院蔬菜花卉研究所