MiR-29a靶向E2F7调控横纹肌肉瘤细胞增殖

作者：王青枝; 徐志蓉; 吴小军; 王艳丽; 张经^*

来源：国际免疫学杂志, 2023, 46(05).

• miR-29a
• 横纹肌肉瘤
• 增殖
• E2F7

目的探讨miR-29a调控横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma, RMS)细胞A-204增殖的作用及分子机制。方法人RMS细胞系A-204购自中国医学科学院细胞库。依据转染的DNA将细胞分为对照组、miR-29a组、E2F7组和miR-29a+E2F7组。采用CCK-8实验检测RMS细胞系A-204细胞的增殖活性, 生物信息学方法预测miR-29a的潜在靶点, 通过荧光素酶报告基因实验验证其靶向作用, 反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR, RT-qPCR)实验及蛋白质免疫印迹实验检测靶点分子E2F7的表达, 流式细胞术检测细胞周期, 细胞体外克隆形成实验检测细胞生长活性。结果在RMS细胞系A-204细胞中, 与对照组相比, miR-29a组的A-204细胞在转染后的48 h和72 h细胞增殖活性显著下降, 差异具有统计学意义[(1.97±0.15)比(1.69±0.11)、(4.69±0.32)比(2.73±0.28), t=3.70、7.98, P值均<0.05)]。荧光素酶报告基因实验检测结果表明, 与对照组相比, miR-29a组的E2F7荧光素酶活性显著下降, 差异具有统计学意义[(44.90±5.62)比(11.67±4.55), t=7.96, P<0.05]。RT-qPCR及Western blot检测结果显示, 与对照组相比, miR-29a组E2F7 mRNA及蛋白表达水平显著下调, 差异具有统计学意义[(0.95±0.04)比(0.59±0.07), (1.04±0.06)比(0.28±0.02), t=7.73、16.89, P值均<0.05];流式细胞染色结果显示, 与对照组相比, E2F7组细胞G1期细胞比例显著下降, G2/M期比例显著升高, 差异具有统计学意义[%:(82.60±2.75)比(70.83±1.99)、(18.54±0.73)比(12.66±0.37), t=6.00、12.44, P值均<0.05];细胞克隆形成实验结果表明, 与对照组相比, E2F7组细胞克隆数显著下降, 差异具有统计学意义[个:(59.70±3.90)比(68.80±4.30), t=3.01,P<0.05]。与miR-29a组相比, miR-29a+E2F7组A-204克隆形成数明显增加, G1期细胞比例显著升高, G2/M期细胞比例显著下降, 组间差异具有统计学意义[(32.70±4.20)比(54.70±6.20), (79.59±1.58)%比(90.12±2.34)%、(12.34±0.52)%比(5.59±0.28)%, t=5.09、6.46、19.80, P值均<0.05]。结论 mi R-29a可以通过下调E2F7的表达阻断RMS细胞有丝分裂, 抑制细胞增殖。

• 单位
  华中科技大学; 西安市第一医院