甘油-3-磷酸脱氢酶1-样酶通过调节细胞凋亡对肾透明细胞癌的影响

作者：刘廷; 祝恒成; 杨康; 程帆^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(08): 1590-1594.

• 甘油-3-磷酸脱氢酶1样酶
• 肾透明细胞癌
• 凋亡

目的探讨甘油-3-磷酸脱氢酶1-样酶(GPD1L)对肾透明细胞癌的影响及其机制。方法选择来自肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因表达综合(GEO)的两个主要的微阵列数据库(GSE16441、GSE36895、GSE53757、GSE66270、GSE68417), 探讨在肾透明细胞癌(ccRCC)肿瘤样本中低表达基因, 并进行生存分析。选择与患者生存差异最显著的基因GPD1L进行体外验证。体外培养正常人肾小管上皮细胞HK-2及ACHN、786-O、769-P 3种人肾细胞癌细胞株, 利用聚合酶链反应(PCR)和Western blot验证GPD1L在肾癌细胞株中的表达量。利用GSE16441微阵列数据进行GPD1L的单基因富集分析, 观察GPD1L参与调控的相关通路。随后利用pcDNA3.1过表达质粒, 过表达ACHN、769-P肾癌细胞中GPD1L的表达, 利用划痕、原位缺口末端标记法(TUNEL)、流式细胞术和Western blot探讨GPD1L对肾癌细胞迁移、凋亡的影响。多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用LSD-t检验。结果对5个ccRCC微阵列数据集的综合分析确定了ccRCC中SLC4A1、GPD1L、CLCNKB 3个显著的低表达基因, 并且这3个基因的表达量均与患者的生存时间呈正相关(P<0.05)。PCR和Western blot结果表明, 在ACHN、786-O、769-P 3种细胞株中, GPD1L mRNA和蛋白的表达水平显著低于HK-2细胞(转录表达值:0.163±0.067比1.000±0.124, t=7.838, P<0.01;0.338±0.171比1.000±0.124, t=6.982, P<0.01;0.626±0.147比1.000±0.124, t=5.632, P<0.05)。Western blot结果显示, 在ACHN、769-P肾癌细胞中, pcDNA-GPD1L组GPD1L蛋白的表达量明显高于pcDNA-Vector组(条带相对灰度值:2.343±0.371比1.000±0.122, t=5.776, P<0.01;3.207±0.537比1.000±0.082, t=6.224, P<0.01);肾癌样本中GPD1L单基因GSEA富集分析显示凋亡相关通路被明显抑制。同时, pcDNA-GPD1L组细胞凋亡率明显高于pcDNA-Vector组[流式:(30.14±1.05)%比(5.20±1.21)%, t=7.775, P<0.01;(28.54±2.13)%比(3.44±1.34)%, t=6.862, P<0.01], 划痕结果也显示pcDNA-GPD1L组细胞增殖能力明显低于pcDNA-Vector组。结论过表达GPD1L能够通过激活肾透明细胞癌内的细胞凋亡, 而抑制肾透明细胞癌的发展。

• 单位
  武汉大学人民医院