USP7抑制MDA5的K48位泛素化正向调控EV71感染炎症反应的机制研究

作者：潘倩瑜; 林小嫚; 孙颖; 杨洪; 孟君

来源：中国免疫学杂志, 2024, 1-13.

• 肠道病毒71型
• 泛素特异性蛋白酶7
• 黑色素瘤分化相关基因5
• 天然免疫

目的：探讨USP7对EV71感染免疫和炎症反应的调控作用及机制。方法：以PMA诱导THP-1细胞分化为t-M?细胞，利用USP7抑制剂P22077抑制处理细胞，分为DMSO对照组和P22077实验组，以EV71感染细胞，ELISA检测上清中IL-6、CCL3、TNF-α的浓度水平；RT-qPCR检测EV71-VP1的RNA表达，空斑试验检测细胞上清中病毒滴度变化；Western blot检测天然免疫信号通路相关分子的表达或磷酸化水平。构建Myc-USP7和Flag-MDA5的全长质粒并转染于HEK293T细胞中，分别用Myc抗体和Flag抗体进行蛋白质免疫共沉淀（Co-IP），检测外源性USP7与MDA5的相互作用；以EV71感染t-M?细胞，分别用USP7抗体和MDA5抗体进行Co-IP检测两者相互作用。以EV71感染DMSO对照组和P22077实验组t-M?细胞，CHX追逐实验检测MDA5和下游相关分子的表达。共转染Flag-MDA5、Myc-USP7、HA-Ub或HA-K48质粒，用Flag抗体进行Co-IP检测Myc-USP7调控Flag-MDA5泛素化及泛素化类型。用MDA5抗体进行Co-IP检测t-M?细胞中USP7调控MDA5泛素化类型。结果：在EV71 感染细胞中，抑制USP7后：IL-6、CCL3、TNF-α的蛋白质水平表达降低（P<0.05）；EV71复制增强（P<0.05）、滴度增高；MDA5表达降低、天然免疫信号通路中p-IKKα/β、p-IκBα和p-p65活化减弱。USP7可与MDA5相互作用，通过抑制MDA5的K48位泛素化抑制MDA5降解。结论：USP7通过抑制MDA5的K48位泛素化修饰稳定MDA5表达，从而正向调控EV71感染免疫和炎症反应。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心; 公共卫生学院; 南方医科大学