HIV相关脑病患者中枢神经系统来源的HIV-1 Tat蛋白对HUVECs活性的影响

作者：郑文慧; 秦泽明; 李昕; 曹馨月; 单晓宇; 温红玲; 王志玉; 黄涛; 赵丽^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2019, 32(06): 561-565.

• HIV相关脑病
• HIV-1tat
• 蛋白纯化
• 人脐静脉内皮细胞
• 细胞活性

目的在原核细胞中表达并纯化HIV相关脑病(HIV-associated dementia,HAD)患者基底核(basal ganglia,BG)来源HIV-1 Tat蛋白,研究其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)活性的影响。方法以本室保存的重组质粒pGEX-KG-tat为模板扩增tat,构建重组表达载体pET-32a-tat。转化BL21(DE3)并用IPTG诱导表达Tat蛋白。Tat蛋白经镍亲和层析柱和凝胶过滤预装柱纯化、SDS-PAGE和Western blot(WB)鉴定后浓缩,测定BCA蛋白浓度,cck-8检测不同浓度Tat对HUVECs活性的影响。结果在BL21大肠杆菌中表达、纯化得到了纯度较高的Tat蛋白,BCA测定浓度为0.47 mg/ml。随着Tat浓度的增加,HUVECs活性逐渐降低,与阴性对照组相比,100 ng/ml、200 ng/ml两组细胞活性差异均无统计学意义(P>0.05),300 ng/ml、400 ng/ml、500 ng/ml、1 000 ng/ml四组细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05),但四组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在原核细胞中高效表达了具有生物学活性的HIV-1 Tat蛋白,浓度达到300 ng/ml可显著降低HUVECs的活性。

• 单位
  公共卫生学院; 山东省疾病预防控制中心; 山东大学