烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

作者：吴彦辉; **卫; 张生杰; 牛龙龙; 白静科; 李成军; 李建华^*

来源：安徽农业科学, 2023, 51(12): 171-175.

• 烟草花叶病毒
• 实时荧光定量PCR
• TaqMan探针法

[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein, CP)基因保守序列设计引物及探针，通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析，建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好，与其他常见的烟草病毒无交叉反应；灵敏度高，检测下限可达到4.53×101 copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍；建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R2)为0.993 3,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好，重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品，检测结果一致，进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。

• 单位
  河南省烟草公司许昌市公司; 河南省农业科学院