外泌体转运miR-223改善创伤性脑损伤的作用和机制

作者：孙衍昶; 徐鹏翔; 何青龙; 欧阳一彬; 莫业和^*

来源：安徽医科大学学报, 2023, 58(07): 1111-1118.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.07.009

• 创伤性脑损伤
• miR-223
• 外泌体
• 小胶质细胞
• NLRP3炎性小体

目的 探究外泌体(Exo)转运miR-223对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织损伤与小胶质细胞活化的影响及机制。方法 通过脂质体法分别将miR-NC质粒、miR-223 mimic质粒转染至HEK293细胞，实时荧光定量PCR测定细胞中miR-223表达水平；提取转染后HEK293细胞Exo,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析及Western blot对Exo进行鉴定，并采用实时荧光定量PCR测定Exo中miR-223表达水平；将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NC-Exo组、miR-223-Exo组，每组10只。除假手术组外的3组大鼠均通过改良Feeney自由落体法制备TBI模型，NC-Exo组与miR-223-Exo组大鼠分别经尾静脉注射转染miR-NC质粒细胞来源的Exo、转染miR-223 mimic质粒细胞来源的Exo; 2周后，苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠脑组织病理学变化，尼氏(Nissl)染色检测各组大鼠尼氏体改变与分布情况，酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平，免疫荧光双染法观察各组大鼠脑组织内Nod样受体蛋白3(NLRP3)与离子钙接头蛋白(Iba-1)表达，Western blot测定各组大鼠脑组织内NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达水平。结果 细胞转染后，与对照组和miR-NC组比较，miR-223组细胞中miR-223相对表达量显著增加(P<0.05);分离的颗粒物具有典型的Exo形态，粒径峰值大约处于120 nm, Exo标志蛋白CD9、CD63及CD81均明显高表达，且miR-223相对表达量显著增加(P<0.05)。与模型组比较，miR-223-Exo组大鼠脑组织损伤现象得到改善，尼氏体形态恢复且数目增加，血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05),脑组织内NLRP3与Iba-1荧光染色强度减少(P<0.05),同时，脑组织内NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量均下调(P<0.05)。结论 Exo转运miR-223能够明显改善TBI大鼠脑组织损伤，抑制小胶质细胞激活，该作用可能与抑制NLRP3炎性小体活化相关。

• 单位
  海南医学院第二附属医院