新型耐热耐酸普鲁兰酶的分离纯化与酶学特性分析

作者：高兆建; 陈雪莲; 王先凤; 许祥; 李宝林; 焦魏; 芦宁; 尚业成

来源：食品工业科技, 2019, 40(04): 75-81.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019.04.012

• 普鲁兰酶
• 泡盛曲霉XF
• 分离纯化
• 酶学性质

从泡盛曲霉(Aspergillus awamori) XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶(PulXF)并研究其酶学性质。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF。纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg。SDS-PAGE检测得单条带,表明PulXF为单亚基蛋白,分子量63.7 kDa。在50-80℃,pH4.58.0范围内,酶能保持高活性,最适反应温度60℃,最适pH5.0。在较广的pH范围内(pH3.08.0),28℃下,经过24 h酶活能保持80%以上活性。Km值和Vmax分别为0.92 mg/mL和11.90μmol/min。酶活测定及TLC分析显示PulXF对普鲁兰多糖有强水解活性,终产物麦芽三糖;对支链淀粉和可溶性淀粉有较弱活性,对直链淀粉、α-环糊精、β-环糊精和糖原无活性。表明从泡盛曲霉XF分离的PulXF属于Ⅰ型普鲁兰酶。Ca2+、Zn2+和Mg2+能够促进酶的活性,其中Ca2+激活作用最强。而PulXF在5%浓度的SDS、CTAB、Tween 80和30%的乙醇中保持高稳定性。基于PulXF在苛刻环境下的高稳定性及高活性,很有希望在淀粉加工、食品饮料等领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中使用。

• 单位
  徐州工程学院; 邳州市金大地肥料有限公司; 江苏智荟生物科技有限公司