人骨形成蛋白-2基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

作者：张莉; 马宁; 高文信; 张明

来源：吉林大学学报(医学版), 2007, 33(03): 435-439.

DOI：10.3969/j.issn.1671-587X.2007.03.008

• 骨形态发生蛋白质类
• 遗传载体
• 基因
• 转染

目的:克隆人骨形成蛋白-2(BMP-2)基因cDNA,构建含BMP-2基因的重组腺病毒载体。方法:采用RT-PCR方法克隆BMP-2基因cDNA,并插入克隆载体pGEM-T中进行全序列分析。将BMP-2基因cDNA克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-BMP2重组质粒,再将其中的表达盒克隆入Adeno-X腺病毒DNA中,获得重组腺病毒DNA-pAd-BMP。结果:成功地克隆长约1200 bp的BMP-2 cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到人骨形成蛋白-2重组腺病毒,其滴度约为1×1011nfu.L-1,该滴度可满足进一步的BMP-2成骨作用的研究。结论:成功地构建BMP-2腺病毒载体。

• 单位
  吉林大学; 基础医学院