产气荚膜梭菌多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作者：王景松; 郭亚男^*; 王健霖; 李继东; 王建东^*

来源：中国兽医科学, 2023, 1-12.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0023

• 产气荚膜梭菌
• 毒素基因
• 多重TaqMan荧光定量PCR

为建立一种可以对产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)5种毒素基因cpa、cpb、etx、itx和cpe进行快速检测并分型的方法，根据NCBI数据库中公布的产气荚膜梭菌cpa、cpb、etx、itx和cpe毒素基因序列，设计特异性引物和TaqMan探针，通过构建标准阳性质粒、优化反应条件、构建标准曲线，并进行特异性、灵敏度、重复性试验以及临床样本检测，建立可同时检测5种毒素基因的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的扩增曲线具有良好的线性关系，R2＞0.99，90%＜E＜110%；特异性强，与不同病原之间无交叉反应；灵敏度高，其5种阳性质粒的检测下限均为102 copies/μL；重复性好，变异系数均小于2%；使用该方法对30份产气荚膜梭菌菌液样品进行检测，共检出30份阳性样品，其中产气荚膜梭菌A型11株，C型1株，D型18株。上述结果表明，本试验建立的产气荚膜梭菌多重TaqMan荧光定量PCR检测方法为产气荚膜梭菌病的诊断、防控以及净化提供了便捷、快速高效的技术支持。

• 单位
  宁夏大学; 动物科技学院; 宁夏农林科学院动物科学研究所