基于p53/AMPK信号通路观察益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的影响

作者：吴俏兰; 宋婷; 陈泽涛; 陈修保; 张宜晨; 陈维达^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 27(22): 65-75.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20212121

• 益气扶正解毒汤
• A549细胞
• 自噬
• p53/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路

目的:探讨益气扶正解毒汤对A549细胞自噬水平和生长的作用及机制。方法:制备益气扶正解毒汤含药血清干预A549肺癌细胞。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测A549细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1),p62,p53蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),磷酸化AMPK(p-AMPK),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白的水平,免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)蛋白水平,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色、侵袭实验(Transwell)和β-半乳糖苷酶染色分别检测含药血清对细胞增殖、侵袭、衰老情况的影响;设置自噬抑制剂甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol·L-1)干预组,即分为10%胎牛血清组(空白组),10%正常血清组(正常组),10%含药血清低、中、高剂量组,10%高剂量含药血清加3-MA(高剂量+3-MA)组,检测各组细胞增殖、侵袭、衰老水平;并设置p53抑制剂(PFT-α,10μmol·L-1)组,即分为正常组,PFT-α组,高剂量组,高剂量+PFT-α组,检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1表达水平和MAP1LC3B免疫荧光强度及各组细胞增殖、侵袭、衰老的情况。结果:与空白组、正常组比较,干预A549细胞48 h,益气扶正解毒汤中、高剂量组LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈剂量依赖性升高(P<0.01);益气扶正解毒汤低、中、高剂量组p62,p-mTOR/mTOR蛋白下降(P<0.05,P<0.01),p53,p-AMPK/AMPK蛋白表达升高(P<0.01);益气扶正解毒汤低、中、高剂量组A549细胞增殖、侵袭数量明显降低,细胞衰老数量显著增多(P<0.01),同时MAP1LC3B免疫荧光强度增强,且益气扶正解毒汤高剂量组效果最佳;与益气扶正解毒汤高剂量组比较,益气扶正解毒汤高剂量+3-MA组、益气扶正解毒汤高剂量+PFT-α组发生增殖、侵袭的细胞数量均增加,而发生衰老的细胞数量明显减少(P<0.05,P<0.01),同时,高剂量+PFT-α组的MAP1LC3B免疫荧光强度减弱及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:益气扶正解毒汤可经p53/AMPK信号通路上调A549细胞自噬水平,进而抑制A549细胞增殖、侵袭迁移,促进细胞衰老,在抑制肺癌进展中具有重要作用。

• 单位
  第一临床医学院; 山东中医药大学; 山东中医药大学附属医院