A型塞内卡病毒VP2蛋白多表位抗原免疫原性分析

作者：陶世宇; 茹毅; 陈娇; 郝荣增; 李亚军; 卢炳州; 石正旺; 刘学荣; 郑海学; 魏彦明^*

来源：农业生物技术学报, 2023, 31(06): 1284-1295.

• A型塞内卡病毒(SVA)
• 病毒结构蛋白2(VP2)
• 重组串联表位蛋白
• 可溶性表达
• 免疫原性

A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新型的小RNA病毒，严重危害我国养猪业的发展。目前尚无有效的SVA疫苗，为探究SVA新型亚单位疫苗，本研究以SVA的病毒结构蛋白2(viral structural protein 2, VP2)基因序列为基础，选取利用生物信息学方法预测的B细胞表位序列及已报道的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV) 3A蛋白的T细胞表位基因，密码子优化后通过柔性连接肽进行串联连接，分别构建重组表达质粒pET28a-rSVP2-B和pET28a-rSVP2-BT。将原核可溶性表达并纯化的重组串联表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT，经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，评价其免疫原性。结果显示，重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)，经诱导表达后，目标蛋白均正确表达，SDS-PAGE分析显示，其相对分子质量分别为34和38 kD。Western blot结果显示，rSVP2-B和rSVP2-BT与SVA阳性血清均具有良好的反应原性。纯化后rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠产生的体液免疫水平无显著差异，均诱导产生了较强的特异性IgG抗体及IgG1抗体，且主要诱导偏向于Th2型的体液免疫应答。病毒中和实验结果显示，2种重组蛋白的中和抗体效价介于1∶64～1∶128。同时，rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠也产生了较强的细胞免疫，其中rSVP2-BT免疫组的脾淋巴细胞增殖水平、细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)和干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)水平显著高于rSVP2-B。以上结果表明，成功制备了具有良好免疫原性的重组串联多表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT,rSVP2-BT的免疫原性优于rSVP2-B。本研究为SVA多表位疫苗研制提供理论依据。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 中农威特生物科技股份有限公司; 甘肃农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室