重组G5P蛋白的原核表达纯化及与PrPSc结合能力的鉴定

作者：朱峰; 谭家亮; 吴江; 杨茹; 毕昊^*; 夏剑波^*

来源：华中科技大学学报(医学版), 2021, 50(01): 38-43.

• G5P
• 原核表达
• 纯化
• Sc" name="keyword">PrPSc
• 结合能力
• 鉴定

目的利用基因克隆技术制备重组G5P蛋白,并鉴定其结合朊病毒(PrPSc)的能力。方法化学合成G5P全长基因核苷酸片段,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)质粒中,获得pET-28a-c(+)-G5P重组质粒。将其转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化重组G5P蛋白。制备重组G5P蛋白偶联磁珠,将其与含有或不含有PrPSc的人脑匀浆液混合,进行PrPSc的捕获实验。利用Western blot检测技术鉴定重组G5P蛋白与PrPSc结合的特异性与结合力。结果成功获得纯化的重组G5P蛋白,捕获实验显示重组G5P蛋白偶联磁珠仅从散发性克雅氏病(sCJD)患者的脑匀浆液中捕获到朊蛋白,而从非CJD患者的脑匀浆液中未捕获到朊蛋白。捕获的朊蛋白经蛋白酶K处理后仍能检出Western blot条带,证明重组G5P蛋白结合的朊蛋白为PrPSc而非正常朊蛋白。将sCJD患者的脑匀浆液稀释10000倍后重组G5P蛋白仍可捕获到PrPSc。结论该研究利用基因克隆技术成功获得了纯化的重组G5P蛋白。该蛋白具有特异性结合PrPSc的能力,并具有较高亲和力。这为下一步研发新型朊病毒检测技术和滤除技术打下基础。

• 单位
  广东三九脑科医院; 阳新县妇幼保健院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院; 武汉血液中心