分子改造羰基还原酶CpCR提高其催化合成2-苯乙醇能力

作者：陈孟军; 吕育财; 龚大春; 郭金玲

来源：食品与发酵工业, 2023, 49(19): 30-37.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.034383

• 羰基还原酶
• 易错PCR
• 2
• 4-二硝基苯肼
• 半理性设计
• 2-苯乙醇

该研究对近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR进行分子改造，以提高其催化合成2-苯乙醇的能力。通过易错PCR构建突变文库，利用2,4-二硝基苯肼高通量筛选阳性突变株，测序确定氨基酸突变位点。再通过蛋白质半理性设计进行虚拟饱和突变，采用定点突变技术进行构建和评价。筛选获得突变体T171F具有更强的催化能力和热稳定性。进一步考察了催化时间、温度、pH值和底物浓度对wtCpCR和T171F催化合成2-苯乙醇的影响。研究表明，酶最适催化合成2-苯乙醇的温度为30℃;T171F最适催化合成2-苯乙醇的pH为6.5;苯乙醛的质量浓度为1 000 mg/L时T171F产率可达91.24%,是wtCpCR的2.8倍。此外，突变体T171F相比wtCpCR催化时间由10 h降低到4 h,催化效率得到很大的提高。该研究为羰基还原酶催化合成2-苯乙醇提供科学基础，同时具有一定的应用价值。

• 单位
  三峡大学