两步法细菌内同源重组制备重组单核细胞趋化因子-1腺病毒

作者：汪普宁; 彭和平; 刘启才

来源：现代临床医学生物工程学杂志, 2006, (04): 366-368.

• 腺病毒
• 同源重组
• 单核细胞趋化蛋白1 Adenovirus
• Homologous recombination
• Monocyte chemoattractant protein-1

目的两步法提高细菌内同源重组效率制备重组人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)复制缺陷型腺病毒。方法制备含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌B J5183,H indⅢ酶切筛选未发生细菌内重组的菌落,并将其制备成感受态(B J5183pAdEasy-1)。RT-PCR法克隆得到MCP-1 cDNA片段,连接到pMD18-T载体后亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack上构建重组穿梭载体pAdTrack-MCP-1。Pm eⅠ酶切线性化并碱性磷酸酶处理pAdTrack-MCP-1,然后电穿孔转化感受态B J5183pAdEasy-1。PacⅠ酶切筛选得到正确重组的腺病毒载体pAd-MCP-1...

• 单位
  广州医科大学