逆转录环介导等温扩增技术快速检测大豆花叶病毒

作者：张雯娜; 李晋玉; 田金艳; 卫其巍; 智海剑; 陶小荣

来源：大豆科学, 2014, 33(03): 422-428.

• 大豆花叶病毒
• 快速检测
• RT-LAMP
• 大豆
• 种子带毒检测

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是一种在世界很多国家广泛分布并极具破坏性的植物病毒,导致大豆严重减产和种质衰退,每年都会给很多国家带来巨大的农业经济损失,为此,建立了一种逆转录环介导等温扩增(Reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)全新的SMV检测技术,利用该技术可以快速、准确与有效地检测大豆植株和种子中携带的SMV。根据GenBank数据库中大豆花叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计并筛选到了SMV RT-LAMP特异性引物组,应用该引物组优化了RT-LAMP反应参数,灵敏度实验结果表明,RT-LAMP检测SMV比普通RT-PCR灵敏度高10100倍。结合RNA粗提法,建立了一步法RT-LAMP快速、灵敏地检测到植物叶片中的SMV。加入荧光染料SYBR Green I则可在反应管中直接观察检测结果,实现了检测的可视化。该RTLAMP技术还可灵敏地检测到大豆种子中携带的SMV。RT-LAMP检测方法第一次应用于SMV的检测,具有灵敏度高、速度快和特异性强的优点,可应用于实验室和田间大豆样品SMV的快速检测。

• 单位
  南京农业大学; 大豆研究所; 作物遗传与种质创新国家重点实验室