猪δ冠状病毒(PDCoV)N蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：陈汭; 付嘉钰; 刘浩宇; 李成; 赵玉佳; 胡靖飞; 瞿欢; 曹三杰; 文心田; 文翼平; 赵勤; 伍锐; 黄小波

来源：生物技术通报, 2020, (08): 104-110.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-1196

• 猪δ冠状病毒
• N蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体 porcine deltacoronavirus
• N protein
• prokaryotic expression
• polyclonal antibody

旨在表达和纯化猪δ冠状病毒(PDCoV)N蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体。以RT-PCR扩增PDCoV N基因并与表达载体pET-28a构建重组质粒,转化Transetta(DE3)菌株诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达,以纯化的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot验证兔抗血清特异性,间接ELISA测定抗血清效价。利用间接免疫荧光试验(IFA)、免疫荧光试验(IF)、流式细胞术(FCM)鉴定其诊断应用价值。重组N蛋白为可溶性表达,大小约为44 kD,制备的兔抗N蛋白抗体效价可达1∶204 800。IFA与FCM试验证实该抗体能与PDCoV特异性结合,与PEDV及TGEV...

• 单位
  四川农业大学; 农业部