脂氧素A4对小鼠肺上皮细胞高体积分数氧损伤的保护作用

作者：罗妍妍; 陈筱青; 吴升华; 李冰洁; 李淑君; 卢红艳

来源：中华实用儿科临床杂志, 2017, 32(04): 308-312.

• 脂氧素A4
• 血红蛋白加氧酶1
• 高体积分数氧损伤
• 支气管肺发育不良

目的探讨脂氧素A4(1ipoxin A4,LXA4)在小鼠肺上皮细胞(MLE-12)高体积分数氧(高氧)损伤中的保护作用。方法体外培养MLE-12细胞,分为空气组、空气+LXA4组、高氧组、高氧+LXA4组。采用反转录PCR(RT-PCR)验证LXA4受体(ALX)。设置终浓度为1 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L的LXA4预处理MLE-12细胞1 h、6 h、12 h、24 h,将细胞置>850 mL/L的高氧定制容器中培养12 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血红蛋白加氧酶1(HO-1)表达量的变化,以确定LXA4的最佳实验浓度和最佳预处理时间;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;台盼蓝染色检测细胞存活率;细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力水平;羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平;qRT-PCR检测HO-1 mRNA表达;免疫荧光、Western blot检测HO-1蛋白表达;酶联免疫吸附测定单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)的表达。结果 MLE-12细胞表达ALX;LXA4的最佳干预浓度为10 nmol/L,最佳干预时间为12 h;高氧组细胞的存活率、细胞活力和SOD水平[(66±8)%、0.67±0.21、(2.38±0.65)kU/L]明显低于空气组[(84±5)%、1.22±0.27、(5.33±1.16)kU/T.],差异均有统计学意义(t=3.98、2.55、4.86,P=0.01、0.03、0.00),高氧+LXA4组[(88±5)%、1.43±0.05、(6.50±0.19)kU/L]明显高于高氧组,差异均有统计学意义(t=4.83、3.52、6.78,P=0.01、0.02、0.00);高氧组HO-1 mRNA和蛋白表达(0.57±0.03、1.31 4-0.11)高于空气组(0.13±0.03、0.24±0.10),差异均有统计学意义(t=8.00、10.10,均P=0.00),高氧+LXA4组(0.78±0.08、1.82±0.09)明显高于高氧组,差异均有统计学意义(t=3.94、4.82,均P=0.00);高氧组炎性因子MCP-1和IL-6水平[(1 025.18±35.51)rig/L、(1 136.65±160.01)ng/L]高于空气组[(467.63±13.69)ng/L、(470.03±118.22)ng/L],差异均有统计学意义(t=16.51、7.48,均P=0.00),高氧+LXA4组[(640.25±61.03)ng/L、(655.48±88.57)ng/L]明显低于高氧组,差异均有统计学意义(t=11.40、5.40,均P=0.00)。结论 LXA4能够保护MLE-12细胞对抗高氧损伤,其机制可能涉及上调HO-1的表达,并抑制炎性因子MCP-1和IL-6的表达。

• 单位
  江苏大学附属医院; 南京医科大学第一附属医院