口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作者：姚怀兵; 赵毅; 刘宏; 张毅; 任方; 黄炯

来源：中国畜牧兽医, 2017, 44(02): 311-318.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.02.002

• 口蹄疫O型病毒
• 二温式RT-PCR
• 检测方法

试验通过对口蹄疫病毒核苷酸序列的比对分析,在O型口蹄疫病毒的P1基因保守区,设计1对特异性引物,应用均匀设计法优化反应参数,建立口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性试验、敏感性试验检测。结果表明,该二温式RT-PCR方法只对口蹄疫O型病毒敏感,对其他血清型的口蹄疫病毒及常见的猪病病毒均不敏感;扩增条带与预期目的片段大小相符,扩增片段经克隆、测序发现与引物所在基因序列的同源性为100%;检测病毒RNA的敏感性为1.665pg/μL,其敏感性与三步法PCR敏感性检测结果没有差异。运用该法对54头攻毒试验的动物进行检测,阳性鉴定结果与三步法PCR鉴定结果一致,与三步法PCR相比该法节省了20min,表明所建立的口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR方法是一种准确、快速、特异、敏感的检测方法。

• 单位
  新疆农业大学; 新疆畜牧科学院兽医研究所; 天康生物股份有限公司