罂粟生物碱合成关键酶STORR的基因克隆及其表达载体构建

作者:陈芳; 常瑜; 魏玉杰; 张兆萍; 龚永福; 苏毓杰; 杨振华
来源:智慧农业导刊, 2023, 3(15): 73-76.
DOI:10.20028/j.zhnydk.2023.15.018

摘要

为研究罂粟生物碱合成关键酶(STORR)在罂粟中的作用,该研究以罂粟叶片cDNA为模板,利用RT-PCR技术,克隆得到STORR基因,并对其序列进行测序分析,利用双酶切方法构建pCambia2301-KY表达载体。研究结果表明,成功克隆到STORR基因,通过生物信息学分析,该基因包含一个长度为2 703 bp的完整开放阅读框,编码900个氨基酸,分子式为C4476H7097N1207O1328S46,理论分子质量为10.05 kD,理论等电点为6.45,不稳定指数为41.70,为不稳定蛋白。用KpnI酶切载体pCambia2301-KY线性化,与回收纯化产物进行重组反应,成功构建STORR基因表达载体,将表达载体成功转化农杆菌GV3101。该研究为后续进行STORR基因功能研究提供理论依据。

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