人宫颈癌癌基因-2 促进SMMC 7721细胞分裂和增殖的机制

作者：杨艳梅; 钱俊波; 郝波; 张国新

来源：中华肝脏病杂志, 2010, 18(11): 837-841.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2010.11.011

• 癌
• 肝细胞
• 癌基因
• 信号传导

目的 建立稳定转染含人宫颈癌癌基因(HCCR)-2的SMMC 7721细胞株,探讨HCCR-2对肝癌细胞生物学特性的影响与在SMMC 7721细胞中HCCR蛋白表达的分子信号通路机制. 方法通过脂质体将HCCR-2的真核表达质粒稳定转染至SMMC 7721细胞,Western blot 检测转染后SMMC 7721细胞中HCCR及其下游基因bcl-2蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐法检测HCCR-2对转染后SMMC 7721细胞生长的影响;流式细胞仪检测转染后SMMC 7721细胞周期和细胞凋亡率的变化.用不同浓度表皮生长因子(EGF)处理SMMC 7721细胞24 h,以及用LY294002预孵育细胞1 h后用EGF(100 ng/m1)处理SMMC 7721细胞24 h,Western blot检测HCCR的表达变化.建立稳定转染缺陷型Akt质粒(DN-Akt-pcDNA3.1)的SMMC 7721细胞,Western blot 检测总Akt、磷酸化Akt、HCCR及其下游基因bcl-2的表达.数据以均数±标准差(-x±s)表示,进行单因素方差分析.结果 转染HCCR-2的SMMC 7721细胞较转染空载体的SMMC 7721细胞及亲本细胞的HCCR表达升高,HCCR下游基因bcl-2的表达也升高;四甲基偶氮唑盐法显示其增殖能力增强,从72 h开始转染组较空载体组增殖速度加快(P＜0.01);流式细胞仪检测其细胞凋亡率下降(7.72%±0.23%与1.28%±0.16%,P＜0.01),处于分裂周期的细胞比例明显增加(15.76%±0.73%与21.62%±1.33%,P＜0.01).EGF可促进SMMC 7721细胞中HCCR的表达,用LY294002处理细胞后EGF对其HCCR表达的促进作用被抑制.转染DN-Akt-pcDNA3.1的SMMC 7721细胞中HCCR的表达下降,其下游基因bcl-2的表达亦下降.结论 EGF可通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导人肝癌细胞SMMC 7721中HCCR蛋白的表达,HCCR可影响人肝癌细胞的细胞周期、凋亡和增殖能力.

• 单位
  南通大学; 南京医科大学第一附属医院