应用RNA干扰技术抑制人胃癌细胞环氧合酶-2基因的表达研究

作者：孙凌宇; 赵亮; 薛英威; 赵育桢; 白静; 傅松滨; 张岂凡

来源：国际遗传学杂志, 2007, 30(3): 161-164,183.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2007.03.001

• 胃癌
• 环氧合酶-2
• RNA干扰
• 基因治疗

目的 研究应用RNA干扰技术进行抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2的表达研究.方法 依据siRNA设计原则,针对人COX-2的Mrna序列,设计并合成3条21 bp的双链RNA,瞬时转染人胃癌细胞SGC-7901,Western印迹t验证基因沉默效率以筛选合适的siRNA序列;根据筛选出的有效序列,合成编码短发卡RNA的双链寡核苷酸,定向克隆到含有U6 RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencerTM2.1-U6 neo真核表达载体,稳定转染胃癌细胞SGC-7901中,经G418筛选,获得克隆细胞.结果 筛选出一条有效的干扰序列,位于291～311 bp,成功构建表达载体,COX-2在蛋白水平的表达明显被抑制.结论 利用化学合成siRNA进行初筛,再构建shRNA表达载体,可快速实现目的基因的表达抑制.

• 单位
  哈尔滨医科大学