一种特殊虫草与冬虫夏草的表型和DNA条形码特征比较分析及鉴别方法研究

作者：张文娟; 李明华; 程显隆; 段庆梓; 魏锋; 华桦; 赵军宁^*; 马双成^*

来源：中国现代中药, 2023, 25(09): 1872-1877.

DOI：10.13313/j.issn.1673-4890.20230117002

• 冬虫夏草
• 限制性内切酶
• 内转录间隔区
• 细胞色素氧化酶Ⅰ

目的：通过对子座和虫体部分进行表型与DNA条形码序列分析，探讨一种发现于四川的特殊冬虫夏草（以下简称特殊虫草）与常见冬虫夏草的区别。方法：体视显微镜观察虫草样品的外部特征；聚合酶链式反应（PCR）扩增得到真菌部位内转录间隔区（ITS）序列和宿主蝙蝠蛾昆虫的细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）序列；利用CodonCode Aligner和MEGA软件进行序列分析，建立邻接（NJ）系统进化树；对ITS序列进行限制性内切酶图谱分析，寻找具有鉴别意义的酶切位点，并通过PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）鉴别进行验证。结果：特殊虫草与常见冬虫夏草相比，虫体头部的颜色明显不同；子座真菌的ITS序列存在7个差异位点，虫体COⅠ序列存在56个差异位点，基于ITS序列及COⅠ序列的NJ系统进化树分析均显示，两者不能聚为一支；在两者差异区域，冬虫夏草存在1个XhoⅠ的酶切位点，因此其ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶XhoⅠ切割为2个片段，特殊虫草不能被XhoⅠ切割，所以酶切前后的PCR产物在琼脂糖凝胶图上没有变化，通过该方法可对两者进行鉴别。结论：发现了一种特殊虫草，其与常见冬虫夏草的真菌子座和宿主蝙蝠蛾昆虫部分均有明显不同，并为鉴别两者提供了有效方法。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 四川省中医药科学院