兔自体真皮成纤维细胞对增生性瘢痕作用的实验研究

作者：杨晓双; 胡鹏; 王达利^*; 魏在荣; 冀玫宏; 罗昭和

来源：中华整形外科杂志, 2018, 34(09): 758-768.

• 增生性瘢痕
• 成纤维细胞
• 细胞移植
• 兔耳瘢痕模型

目的探讨兔耳瘢痕形成早期瘢痕内局部移植自体真皮成纤维细胞(Fbs)对增生性瘢痕形成及创面愈合质量的影响,以探讨Fbs用于增生性瘢痕的防治的可行性。方法运用机械法联合酶消化法从新西兰大白兔背部正中正常皮肤组织中提取真皮Fbs,取第3代生长良好的细胞,向成骨细胞、成脂肪细胞诱导分化。取2只实验兔作为预实验观察对象(即未干预组),于兔双耳腹侧手术形成全层皮肤缺损创面,创面不做任何处理,待其自然愈合,记录完全上皮化时间及增生性瘢痕形成的情况;另取6只实验用兔设立兔左耳为实验组,右耳为对照组,于创面上皮化后第2天(术后20 d)、术后30 d(瘢痕增生最明显时),采用体外培养的经BrdU标记后的第4代自体真皮Fbs于实验组创面及增生性瘢痕周围的皮下至软骨上层之间进行环形注射,对照组在上述相应时间点注射相同剂量的生理盐水。第2次细胞移植后7 d(术后37 d左右)切取增生性瘢痕组织,记录3组(未干预组、实验组、对照组)增生性瘢痕的大体外观及其组织学变化;实验组术后37 d增生性瘢痕组织行免疫荧光染色对移植细胞进行示踪;实时荧光-多聚合酶链反应(Real Time-PCR,RT-PCR)检测对照组及实验组术后37 d增生性瘢痕组织中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和核心蛋白多糖(decorn,DCN)的mRNA表达变化情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测增生性瘢痕组织中DCN、TGF-β1、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白表达情况。结果术后37 d实验组瘢痕较对照组平、软,色泽轻度变浅,体积缩小。组织学结果提示实验组与对照组相比真皮浅层Fbs、炎性细胞数量减少,结缔组织的增生及胶原沉积减少,基底层细胞、胶原纤维排列整齐; RT-PCR结果表明,实验组增生性瘢痕组织中TGF-β1mRNA表达量较对照组明显降低,DCN mRNA表达量明显增高,差异均有统计学意义(P <0. 01)。ELISA结果表明,实验组增生性瘢痕组织中TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量较对照组均显著降低,DCN含量显著增高,差异均有统计学意义(P <0. 01)。结论兔背部真皮Fbs对兔耳增生性瘢痕有明显抑制作用,其机制与促进增生性瘢痕局部组织中DCN表达的上调及TGF-β1表达的下调,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成及细胞外基质的沉积,促进胶原的有序排列等作用有关。

• 单位
  遵义医学院附属医院