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摘要
目的 探讨Rho激酶2(ROCK2)在年龄相关性白内障(ARC)晶状体前囊膜中的表达及其对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞自噬及氧化损伤的影响。方法 收集2020年6月～2021年4月在我院行超声乳化白内障吸出术的ARC患者20例，获取晶状体前囊膜，并获取眼科标本库中无眼科疾病、眼球结构完整且晶状体透明的正常晶状体前囊膜。免疫组织化学染色和Western blot检测ROCK2蛋白表达；将人晶状体上皮细胞HLE-B3随机分为对照组、H2O2组、sh-NC+H2O2组和sh-ROCK2+H2O2组，转染sh-NC或sh-ROCK2至对应组细胞，并用H2O2处理细胞，实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞转染效率，MTT法检测各处理组细胞增殖活性，透射电镜观察细胞内自噬现象，自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后观察自噬溶酶体和自噬体水平，Western blot检测细胞中自噬相关蛋白表达情况，DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平，试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量。结果 与正常组织比较，ARC中ROCK2表达增高(P<0.05);转染sh-ROCK2后成功下调了HLE-B3细胞中ROCK2表达水平(P<0.05);与对照组比较，H2O2处理细胞后，细胞增殖活性显著下降，自噬体明显增多，明显激活了自噬溶酶体和自噬体水平，Beclin-1蛋白相对表达量显著升高，LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著上调，ROS水平显著上升，SOD和GSH-Px的活性均显著降低，MDA含量则显著升高(均P<0.05);与H2O2组比较，细胞转染sh-ROCK2后再用H2O2处理，细胞增殖活性显著提高，自噬体减少，自噬溶酶体和自噬体水平受到抑制，Beclin-1蛋白相对表达量显著降低，LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著下调(均P<0.05),同时，细胞内ROS水平显著下降，SOD和GSH-Px的活性均显著升高，MDA含量显著降低(均P<0.05)。结论 ROCK2在ARC晶状体前囊膜内高表达，下调其表达能够抑制H2O2诱导的人晶状体上皮细胞过度自噬，减少氧化损伤。
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