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摘要
旨在制备禽白血病病毒p27蛋白多克隆抗体和建立一种简便准确的禽白血病病毒的检测方法，通过扩增禽白血病病毒p27目的基因，构建pGEX-6p-1-p27、pET-32a-p27蛋白原核表达载体。将蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔，制备鼠源多克隆抗体和兔源多克隆抗体，制备鼠源多克隆抗体偶联荧光微球，利用三维喷点平台将鼠源多克隆抗体IgG喷涂到样品垫；用划膜仪将纯化后的兔源多克隆抗体IgG和山羊抗兔抗体稀释液划到NC膜上，作为T线和C线，进行试纸条的组装，初步建立了即时检验荧光微球免疫层析检测ALV试纸法，并用POCT试纸条检测临床阳性样本。结果表明：成功构建pGEX-6p-1-p27、pET-32a-p27蛋白原核载体并诱导p27重组蛋白表达。将纯化后的p27融合蛋白与佐剂等容量混合后作为免疫原免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔，成功制备出p27蛋白的鼠源和兔源多克隆抗体，通过血清效价以及Western Blot鉴定显示多抗的免疫原反应良好。荧光微球偶联鼠源多克隆抗体的最适pH值为6.2。POCT试纸条检测结果显示，ALV的阳性样品与荧光微球包被的鼠源多克隆抗体结合良好，T/C数据比其他样本高，且仅有阳性样本和荧光微球包被的鼠源多克隆抗体结合后，在紫外灯的照射下，C线(质控线)和T线(检测线)才均会有荧光条带，与临床诊断结果相符。试验建立的POCT荧光微球免疫层析检测ALV的方法，可为禽白血病病毒的检测提供一种更为简便的方法，为基层兽医临床检测提供便利。
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单位安徽农业大学; 动物科技学院
