锡兰钩虫TIMP基因的序列分析与原核表达

作者：颜欣欣; 杭建雄; 刘云秋; 黄岳; 冉荣坤; 赵琪; 何龙; 李秀; 刘菊玫; 李国清^*

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(09): 969-972.

• 锡兰钩虫
• 金属蛋白酶组织抑制剂
• 基因克隆
• 原核表达
• 序列分析

为表达锡兰钩虫金属蛋白酶组织抑制剂(Ace-TIMP)重组蛋白,本实验根据GenBank中锡兰钩虫TIMP (ANCCEY-04405)基因序列设计引物扩增犬源锡兰钩虫Ace-TIMP基因,利用生物信息学软件对其序列鉴定;根据编码的氨基酸序列进行遗传进化关系分析;构建其重组表达质粒p ET-32a-Ace-TIMP-MP,转化大肠杆菌,并经诱导表达。结果显示,Ace-TIMP基因ORF为648 bp,编码215个氨基酸,包含16个氨基酸的信号肽,具有TIMP家族Cys-X-Cys特征性序列。进化树分析显示Ace-TIMP与犬钩虫TMP-2位于同一分支。经诱导表达与纯化,获得了分子质量约为42 ku的可溶性融合蛋白。本实验克隆了Ace-TIMP基因并利用原核表达系统表达了可溶性的重组蛋白,为Ace-TIMP生物学活性的研究和免疫潜能的评价奠定了基础。

• 单位
  华南农业大学