异柠檬酸脱氢酶1与突变体重组慢病毒的制备及表达

作者：单德志; 张弛; 曹相玫^*

来源：神经解剖学杂志, 2020, 36(02): 200-206.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2020.02.014

• 异柠檬酸脱氢酶1
• 胶质瘤
• 重组慢病毒

目的:制备异柠檬酸脱氢酶1野生型(IDH1)和R132H突变型(mut IDH1)基因重组慢病毒,感染人胶质瘤来源的细胞系U87细胞并观察目的基因的表达。方法:利用基因克隆技术构建IDH1和mut IDH1基因重组慢病毒载体p LVX-IDH1-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro和p LVX-mutIDH1-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro,转染293T细胞,进行慢病毒包装,获得慢病毒颗粒;慢病毒颗粒感染HEK293细胞,采用逐孔稀释滴度测定法测慢病毒滴度;IDH1和mut IDH1基因重组慢病毒感染U87细胞,观察感染效率,Western Blot检测IDH1和mut IDH1基因在U87细胞的表达。结果:成功制备IDH1和mut IDH1基因重组慢病毒颗粒,病毒滴度均为1.0×108TU/ml;感染U87细胞,Western Blot结果显示:IDH1组中IDH1蛋白水平高于mut IDH1组和空载体对照组; mut IDH1组中mut IDH1蛋白条带清晰,表达量高,IDH1组和对照组均不表达mut IDH1蛋白。结论:成功制备IDH1和mut IDH1基因重组慢病毒,感染U87细胞后能使目的基因表达。

• 单位
  基础医学院; 银川市第一人民医院; 山东大学; 宁夏医科大学