检测牛副流感病毒3型恒温隔绝式荧光RT-PCR方法的建立及应用

作者：任云鑫; 汤承; 岳华^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(05): 901-907.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.05.08

• 牛副流感病毒3型
• P基因
• 恒温隔绝式RT-PCR
• 现场检测

牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是引起牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease syndrome, BRDC)的重要病原，为建立一个基于恒温隔绝式RT-PCR(insulated isothermal RT-PCR,iiRT-PCR)的方法实现现场检测BPIV3,本研究根据BPIV3 P基因的保守区域，设计合成引物和探针、优化检测体系和预混检测试剂，成功建立了能够检测BPIV3 A,B和C 3种基因型的iiRT-PCR方法。该方法只能特异性检出BPIV3,而对牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛鼻病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体等无关病原不检出。敏感性试验结果显示该方法对构建的重组质粒阳性标准品的检测下限为4.23 copies/μL。重复性结果显示，批内和批间的变异系数分别为1.37%～1.73%和2.16%～2.58%。采用建立的iiRT-PCR方法和报道的2种TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法对2020-2021年采集自我国内蒙古、河南、宁夏、山西、四川和福建6个省的141份患BRDC肉牛鼻腔棉拭子样本和50份患BRDC牦牛肺脏样本进行检测，iiRT-PCR方法自肉牛样本中检出55份BPIV3阳性(阳性率为39.01%),自牦牛样本中检出22份BPIV3阳性(阳性率为44.00%),而2种TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法自肉牛样本中分别检出40份和48份BPIV3阳性(阳性率为28.39%和34.04%),自牦牛样本中分别检出15份和19份BPIV3阳性(阳性率为30.00%和38.00%),iiRT-PCR检测结果优于2种TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法。将优化的各检测试剂预混后配合使用商品化PetNAD核酸萃取试剂盒，获得检测结果仅需1 h,可实现BPIV3的现场检测。本研究丰富了国内BPIV3的分子流行病学调查资料，并为BRDC的诊断和防控提供了有力的工具。

• 单位
  西南民族大学