siRNA细胞色素c基因静默对大鼠脑皮质神经元体外模拟缺血再灌注损伤的影响

作者：张红; 刘学秋; 梅元武; 张小乔; 郑丽芳

来源：卒中与神经疾病, 2008, (05): 302-306.

• 皮质神经元
• 缺血再灌注
• 内质网应激
• Caspases
• Bcl-2
• 细胞色素c

目的探讨体外模拟缺血再灌注(ischemia/reperfusion,IS/RE)后大鼠脑皮质神经元内质网应激凋亡的机制及抑制细胞色素c(Cytc)表达对内质网应激的影响。方法体外培养SD乳鼠脑皮质神经元,用免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度;用流式细胞术Annexin V、PI双标检测调亡率及活性Caspase-3,-7,-9表达水平;用Western-blot免疫印迹方法检测Caspase-12、GRP78、Bcl-2、Cytc蛋白表达水平。结果SD乳鼠皮质神经元可纯化体外培养;空转染组神经元模拟缺血6h再灌注24h及48h(IS6h/RE24h、48h)细胞凋亡率分别是17.95%、22.62%;Cytc基因静默后凋亡率分别降至10.26%、9.37%,空转染组与转染组比较有统计学意义(P<0.05);空转染组神经元模拟缺血再灌注后GRP78、Cytc、活性Caspase-3、caspase-9、caspase-12表达均增加,Bcl-2表达减少;siRNACytc基因静默后神经元Bcl-2表达增加,GRP78、活性caspase-12、caspase-3、caspase-9表达明显降低,2组比较有统计学意义(P<0.05);空转染组和转染组均未检测到caspase-7表达。结论体外模拟缺血再灌注后脑皮质神经元发生凋亡,线粒体、内质网应激参与了神经元凋亡;抑制细胞色素c释放对内质网应激凋亡有抑制作用。

• 单位
  神经内科; 华中科技大学同济医学院附属协和医院