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摘要
目的探讨西地那非增强5-羟色胺引起的肺动脉平滑肌细胞增殖作用的可能机制。方法体外原代培养猪肺动脉平滑肌细胞,取第3~5代细胞用于实验。细胞随机分为4组:对照组(CON)、5-羟色胺组(HT)、西地那非组(SIL)、西地那非和5-羟色胺联合干预组(S-HT)。细胞传代培养的第3天,给予含0.2%胎牛血清的培养基饥饿72 h,CON组、HT组、SIL组分别给予PBS、10μmol/L 5-HT、1μmol/L西地那非干预;S-HT组提前20 min给予1μmol/L西地那非干预,再给予10μmol/L 5-羟色胺处理。细胞干预60 min后采用Westernblot法测定各组细胞外信号调节激酶(ERK1/ERK2)的磷酸化水平;加入5-羟色胺24 h后,流式细胞法测定细胞周期并计算S期细胞占细胞总数的比例;加入5-羟色胺72 h后MTT法检测细胞增殖程度。结果与CON组相比,HT组ERK1/ERK2的磷酸化水平、S期细胞比例及细胞增殖率明显增加(P<0.05),S-HT组ERK1/ERK2的磷酸化水平、S期细胞比例及细胞增殖率较HT组进一步增加(P<0.05);各组间总ERK1/ERK2水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论西地那非增强5-羟色胺引起的肺动脉平滑肌细胞DNA合成和增殖,可能与ERK1/ERK2的磷酸化水平上调有关。
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