薄荷醇通过激活瞬时受体电位M8(TRPM8)促进BEAS-2B人支气管上皮细胞的细胞因子分泌

作者：胡艺馨; 李敏超^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(07): 577-584.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009218

• 瞬时受体电位M8(TRPM8)
• BEAS-2B细胞
• 钙离子
• 人支气管上皮细胞
• 白细胞介素25(IL-25)
• IL-33
• 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)

目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)在薄荷醇诱导BEAS-2B人支气管上皮细胞表达气道上皮源性细胞因子白细胞介素25(IL-25)、 IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)中的作用及其相关信号转导机制。方法用2 mmol/L薄荷醇处理BEAS-2B细胞1、 2、 3、 4 h,选择IL-25、 IL-33、 TSLP或Ca2+表达较高的时间组,通过小干涉RNA(siRNA)特异性敲低TRPM8(si-TRPM8),采用细胞内钙离子螯合剂1, 2-二(2-氨基苯氧基)乙烷-N, N, N′, N′-四乙酸四乙酰氧甲基酯(BAPTA-AM)及核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)处理。CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测IL-25、 IL-33和TSLP mRNA表达;ELISA检测培养上清液IL-25、 IL-33和TSLP蛋白水平;Fluo-4 AM负载结合流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度;Western blot法检测si-TRPM8对BEAS-2B细胞合成TRPM8蛋白的干扰效率及NF-κB p65蛋白表达的影响。结果与空白对照组比,薄荷醇组IL-25、 IL-33、 TSLP mRNA及蛋白、胞内Ca2+水平和NF-κB p65蛋白表达均增加;敲低TRPM8后,抑制薄荷醇诱导的Ca2+、 IL-25、 IL-33、 TSLP和NF-κB p65表达增加,BAPTA-AM和PDTC均可抑制薄荷醇诱导的IL-25、 IL-33和TSLP的高表达。结论薄荷醇通过激活TRPM8引起Ca2+浓度升高、激活NF-κB通路诱导BEAS-2B支气管上皮细胞IL-25、 IL-33和TSLP的分泌。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院