人椎间盘髓核细胞增殖活性与益肾活血通络方的干预调控

作者：陈江; 肖辉灯; 孙旗; 张帆; 祝永刚; 刘志超; 郭菲宇; 柳根哲^*

来源：中国组织工程研究, 2020, 24(08): 1200-1206.

• 静水压
• NF-κB信号通路
• 髓核细胞
• 益肾活血通络方
• 椎间盘退变

背景:NF-κB信号通路与椎间盘退变的关系是骨科学术界研究热点,深入研究椎间盘中各种信号通路的作用,有助于了解椎间盘退变的发生机制。目的:通过研究不同静水压压力下益肾活血通络方含药血清对人椎间盘髓核细胞NF-κB信号通路的调控作用,以期能从分子生物学角度探讨益肾活血通络方治疗椎间盘退变性疾病的可能机制及作用靶点。方法:将第3代人椎间盘髓核细胞分为8组,分别加入益肾活血通络方含药血清,在体外不同静水压加载条件(0.3,1,3MPa)下作用2,4,6h后,使用倒置相差显微镜观察椎间盘髓核细胞的形态及生长状况;使用透射电镜观察椎间盘髓核细胞的超微结构;采用CCK-8法检测各组髓核细胞的增殖活性;采用Annexin V-FITC/Propidium Iodide凋亡试剂盒检测髓核细胞的凋亡率;采用Western blot法检测髓核细胞内NF-κB p65、CollagenⅡ、ADAMTS-4、MMP-13、Caspase-3的表达。结果与结论:(1)在同一压力及作用时间下压力+中药血清组髓核细胞形态较常压组、单纯压力组更完整,生长状况更好,其中0.3,1MPa压力+中药血清组优于3MPa压力+中药血清组;(2)压力+中药血清组髓核细胞增殖活性更高,其中0.3MPa压力+中药血清组与0.3MPa单纯压力组比较差异有显著性意义(P<0.05);(3)压力+中药血清组椎间盘髓核细胞的凋亡率较常压组、单纯压力干预组低(P <0.05);(4)与单纯压力组比较,压力+中药血清组CollagenⅡ、Caspase-3表达增加,NF-κB p65、ADAMTS-4、MMP-13表达减少(P <0.05);(5)结果表明,益肾活血通络方能增加细胞活性,减少细胞凋亡,有效延缓髓核细胞的退变,其机制可能与椎间盘髓核细胞NF-κB信号通路促进CollagenⅡ、Caspase-3表达,抑制NF-κB p65、ADAMTS-4、MMP-13表达有关。

• 单位
  首都医科大学; 北京中医药大学东直门医院; 北京中医医院