鸡异质核糖核蛋白AB单克隆抗体的制备及鉴定

作者：罗俊; 党露; 郑鹿平; 刘金玲; 柴书军; 赵东; 杨艳艳; 滕蔓^*

来源：河南农业科学, 2022, 51(02): 127-132.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.02.015

• 鸡
• 异质核糖核蛋白
• 单克隆抗体
• 间接免疫荧光试验
• Western blot分析
• 间接免疫细胞化学试验

为研制鸡异质核糖核蛋白AB(hnRNPAB)单克隆抗体，为其生物学功能研究提供关键试剂，构建重组质粒pET-30a-hnRNPAB，转化感受态细胞E.coli BL21，经IPTG诱导表达，并通过树脂Ni对可溶性表达的鸡hnRNPAB蛋白进行亲和层析纯化之后免疫Balb/c小鼠，利用细胞融合技术制备抗鸡hnRNPAB的单克隆抗体细胞株，最终通过间接酶联免疫吸附试验（iELISA）筛选获得1株单克隆抗体杂交瘤细胞株5H2-H1。间接免疫荧光试验（IFA）和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析表明，5H5-H1单克隆抗体可特异性识别鸡胚成纤维细胞（CEF）表达的hnRNPAB蛋白。同时IFA和间接免疫细胞化学试验（ICA）结果还显示，除了特异性识别鸡hnRNPAB蛋白之外，5H5-H1单克隆抗体还可以与源自人、鼠、猴、牛和猪在内的5种常见哺乳动物细胞系表达的hnRNPAB发生特异性反应。

• 单位
  河南省农业科学院; 广州医科大学附属第三医院