血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建

作者：赵海静; 刘琪; 金蕊; 程龙; 刘昱圻; 陈韵岱^*

来源：中华老年多器官疾病杂志, 2022, 21(05): 361-365.

• 泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5
• 重组质粒
• 分子克隆
• 先天性角化不良1蛋白
• 血管生成

目的 构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒，并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法 以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板，将UBR5基因编码区序列分为前后两段，经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中，通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中，通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能，通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用。结果 成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中，并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论 通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。

• 单位
  中国人民解放军总医院; 中国人民解放军军事科学院